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導(dǎo)讀
近日，中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)研究中心梁德生教授團(tuán)隊在新型核酸檢測技術(shù)研究中取得新進(jìn)展，題為“基于單鏈dna修飾的crrna和cas12a的快速、靈敏核酸檢測一步法（rapid and sensitive cas12a-based one-step nucleic acid detection with ssdna-modified crrna）”的最新研究成果在化學(xué)領(lǐng)域國際權(quán)威期刊《分析化學(xué)學(xué)報》（analytica chimica acta）上發(fā)表。中南大學(xué)碩士研究生曾欽龍和周妙金博士為該**的共同第一作者，梁德生教授、鄔玲仟教授和李卓副教授為共同通訊作者，中南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院為唯一作者單位。本研究受國家自然科學(xué)基金、國家重點研發(fā)等項目支持。
基于規(guī)律間隔成簇短回文重復(fù)序列（cr**pr）的核酸檢測技術(shù)在病原體檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速，但由于等溫擴增（rpa）和cr**pr檢測的反應(yīng)不兼容，該技術(shù)在檢測時需要兩步*作，即核酸擴增及隨后的cr**pr檢測。這種檢測方式不僅增加了*作的復(fù)雜性，而且可能導(dǎo)致污染的發(fā)生。此外，cr**pr核酸檢測技術(shù)使用的cr**pr rna（crrna）存在易降解的問題，在一定程度上限制了該技術(shù)的應(yīng)用。針對這些問題，本研究開發(fā)了一種基于cripspr-cas12a的*作簡便、快速、靈敏度高的核酸檢測一步法（casdos）。
casdos檢測原理圖
研究人員通過對crrna兩端進(jìn)行dna堿基修飾的方式，實現(xiàn)了rpa和cr**pr檢測在一步法反應(yīng)中的兼容。研究發(fā)現(xiàn)，dna堿基修飾的crrna在一步法反應(yīng)中的靈敏度提升了100-1000倍，其對病原體gbs、hpv16和hpv18的檢測限均達(dá)到了16.6am。此外，修飾的crrna在rnase r處理實驗中，也表現(xiàn)出了更好的耐受性。在臨床檢測中，casdos對已知基因型的hpv dna樣本的檢測準(zhǔn)確率為100%，而且casdos對**或?qū)m頸拭子樣本的檢測結(jié)果與qpcr結(jié)果也完全一致，該檢測結(jié)果可在30分鐘內(nèi)獲得（從樣品處理到結(jié)果）。
該研究表明casdos具有*作簡便、快速、靈敏度高的特點，其在病原體的檢測領(lǐng)域，尤其是即時檢測（poct）上具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。
來源：中南大學(xué)
中南大學(xué)研究生院(中南大學(xué)研究生院官網(wǎng)-中南大學(xué)研究生院官網(wǎng)導(dǎo)師)


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